Corsi di studio in
Farmacia - Chimica e tecnologia farmaceutiche

E’ disponibile un posto per una Tesi sperimentale su

“analisi gascromatografica di lipidi estratti da embrioni murini trattati con C-4 metilzimosterone,

uno steroide a potenziale attività teratogena”

Background

Studi recenti svolti da gruppi europei e nordamericani suggeriscono che il metilzimosterone, intermedio della sintesi di colesterolo, sia tossico per le Hedgehog proteins, una classe di proteine critiche per il corretto sviluppo embrionale. In questi studi, embrioni murini che accumulano metilzimosterone a causa della mancanza del gene  per la metilzimosterone reduttasi, manifestano gravi malformazioni e presentano alterazioni della cascata di segnalazione molecolare delle Hedgehog proteins. Il fenotipo degli embrioni presenta analogie con le malformazioni osservate nei “disordini post-squalenici”, un gruppo di patologie umane dipendenti dal malfunzionamento di qualche enzima della fase finale della sintesi del colesterolo.

Il nostro laboratorio dispone di ceppi di lievito (S. cerevisiae) ingegnerizzati, nei quali si accumulano grandi quantità di metilzimosterone. Il composto, reperibile sul mercato solo a costi astronomici, può venire prodotto e isolato nel nostro laboratorio in grandi quantità, tempi brevi ed elevato grado di purezza.

Grazie alla disponibilità di metilzimosterone, il nostro gruppo di ricerca ha avviato un progetto in collaborazione con il prof. Matti Poutanen, direttore del Turku Centre for Modelling Disease (TCMD)Università di Turku, Finlandia) sui possibili effetti teratogeni del composto.

La prima fase del progetto (trattamento di topine gravide con metilzimosterone, isolamento degli embrioni, osservazioni morfologiche/istologiche dei diversi organi, determinazione del livello di apoptosi nei tessuti,…) è stata condotta presso il laboratori del TCMD da uno studente del dipartimento nell’ambito del programma Erasmus. Il lavoro, appena concluso, ha dato risultati importanti essendo state osservate significative differenze tra embrioni trattati e non trattati.

Il materiale biologico raccolto è ora pronto per le fasi successive del progetto:

-          Estrazione dei lipidi presenti negli organi degli embrioni trattati per determinare il livello di metilzimosterone e il suo destino metabolico.

-          Analisi degli estratti tramite gascromatografia accoppiata alla spettrometria di massa (GC/MS).  

-          RT-PCR sui diversi campioni per determinare il livello di espressione di proteine critiche per la cascata delle Hadgehog proteins e della sintesi del colesterolo.

Scopo della tesi nell’ambito del progetto

Lo scopo principale della tesi è la determinazione del contenuto di metilzimosterone nei campioni biologici derivanti da embrioni murini trattati e l’identificazione dei suoi derivati metabolici.

Articolazione del lavoro

-          progettazione e realizzazione di un efficace procedura di estrazione quantitativa dal materiale biologico

-          messa a punto di un metodo analitico GC/MS per l’analisi quali/quantitativa degli estratti lipidici.

Compatibilmente con il tempo a disposizione, potrà essere svolta anche una parte del lavoro di biologia molecolare, orientato a determinare i livelli di mRNA nei campioni biologici con la tecnica dell’RT-PCR.

INFORMAZIONI: Gianni Balliano, Arianna Binello, Simona Oliaro