Corsi di studio in
Farmacia - Chimica e tecnologia farmaceutiche

BACKGROUND Il progetto nasce dall’osservazione casuale che il FENEXAMIDE, potente fungicida usato in agricoltura, è un inibitore specifico, nel fungo Botrytis cinerea (muffa grigia), della sterolo 3-chetoreduttasi, un enzima che il nostro gruppo studia da anni in Saccharomyces cerevisiae. Studi di tossicità condotti da altri gruppi hanno rivelato che il fenhexamide ha una bassa tossicità su organismi diversi, uomo compreso. Anche l’effetto sul lievito durante la fermentazione alcolica sembra essere modesto. Non è mai stato chiarito, però, se la diversità di citotossicità tra Botrytis cinerea e altri organismi dipende dalla diversa specificità di azione del composto sull’enzima di tali organismi o da altri fattori. Non sono mai state chiarite, quindi, le basi molecolari della specificità di azione del fenhexamide. PROGETTO L’effetto inibitorio del Fenexamide verrà studiato in omogenati di lievito esprimenti la sterolo-3-cheto reduttasi di organismi diversi, incubati con 3-chetosteroidi radioattivi. Scopo del progetto è determinare la specificità di inibizione del fenexamide e di riconoscere la basi molecolari di tale specificità. ARTICOLAZIONE DEL PROGETTO -Coltura di Botrytis cinerea, isolamento del conidi e loro omogenizzazione (in collaborazione con il lab di microbiologia della prof. Vivian Tullio).  -Preparazione dei 3-chetosteroidi radioattivi (substrati dell 3-chetosteroide reduttasi) per via biologica. Incubazione degli omogenati di conidi con i substrati radioattivi dell’enzima sterolo-3-chetoreduttasi, in assenza e in presenza di fenhexamide a diverse concentrazioni. -Analisi dei risultati: tipo di inibizione, IC50, Ki ecc… TECNICHE SPERIMENTALI -Colture cellulari -Omogeneizzazione e frazionamento subcellulare -Determinazione di attività enzimatiche con traccianti radioattivi -Cromatografia su strato sottile -Tecniche di manipolazione di molecole marcate -Tecniche di conteggio della radioattività (radioscansione e scintillazione liquida).

NOVITA' I saggi enzimatici verranno condotti anche sulle steroide-3-cheto reduttasi umana e di lievito espresse in E. coli.