Corsi di studio in
Farmacia - Chimica e tecnologia farmaceutiche

BACKGROUND

In tutti gli eucarioti, il gene ERG28 codifica per una proteina non enzimatica appartenente al complesso della demetilazione in C-4 degli steroli. Questa proteina funziona da perno di aggregazione degli enzimi del complesso, la C-4 metil ossidasi (Erg25p), la 3-idrossi deidrogenasi/C-4 decarbossilasi (Erg26p) e la 3-chetosteroide reduttasi (Erg27p).

La "ERG28 deficiency" è stata studiata alcuni anni fa nel lievito S. cerevisiae dal prof. Martin Bard della Indiana University (USA), che ha descritto gli effetti della lesione genica sull'apparato dei demetilazione e sull'intera sintesi dell'ergosterolo. Nell'uomo, sono noti due "cholesterol disorders" dipendenti da lesioni geniche dell'apparato di demetilazione in C-4 degli steroli, uno associato alla ERG25 deficiency, l'altro associato alla ERG26 deficiency (quest'ultimo noto come sindrome di CHILD). Si ritiene che, nell'uomo, la ERG28 deficiency possa essere all'origine di un "cholesterol disorder" non ancora identificato.

SCOPO

Determinare in cellule di mammifero l'effetto della mancanza della proteina Erg28p sull'attività del complesso della C-4 demetilazione e sull'intera sintesi del colesterolo.

BREVE ARTICOLAZIONE DEL PROGETTO

Su fibroblasti murini immortalizzati, privi del gene ERG28 (Forniti dalla Dott. Gail Hermann, Center for Molecular and Human Genetics, Columbus, OH, USA), verrà condotta una serie di determinazioni di attività enzimatiche con traccianti radioattivi, al fine di determinare l'effetto della lesione genica sull'intera via di sintesi del colesterolo, e soprattutto sugli enzimi dell'apparato di demetilazione in C-4. L'effetto sull'intera via metabolica verrà studiato attraverso colture cellulari incubate con acetato radioattivo. Sui lisati cellulari, invece, si determineranno specifiche attività enzimatiche incubando i preparati con substrati radioattivi quali lo squalene, lo squalene epossido, il lanosterolo, il 4-metil zimosterone e lo zimosterone. Dopo l'incubazione, gli estratti insaponificabili verranno analizzati per TLC, e la distribuzione di radioattività tra i componenti verrà determinata per radioscansione delle lastre cromatografiche.

Per altri particolari tecnici e metodolodici si rimanda alle schede relative alle altre tesi sperimentali proposte